低轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞實驗操作步驟

實驗準(zhǔn)備

細(xì)胞系選擇：選擇低轉(zhuǎn)移性的肺癌細(xì)胞系，如A549、H1299等。

試劑和耗材準(zhǔn)備：準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)基（如DMEM或RPMI-1640）、血清（如FBS）、抗生素、PBS緩沖液等。

儀器設(shè)備準(zhǔn)備：準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、離心機(jī)、移液器等。

細(xì)胞復(fù)蘇

從液氮中取出凍存的細(xì)胞，迅速放入37°C水浴中解凍。

將解凍后的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含有適量培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻。

1000 rpm離心5分鐘，棄上清，加入適量新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，置于37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代

當(dāng)細(xì)胞生長至80-90%匯合時，進(jìn)行傳代。

用PBS緩沖液輕輕洗滌細(xì)胞，去除培養(yǎng)基。

加入適量胰白酶，37°C孵育1-2分鐘，直至細(xì)胞從瓶壁脫落。

加入等量含血清的培養(yǎng)基，終止胰白酶作用。

1000 rpm離心5分鐘，棄上清，加入適量新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

按照1:2或1:3的比例將細(xì)胞懸液分至新的培養(yǎng)瓶中，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞實驗

增殖實驗：使用CCK-8試劑盒或MTT法檢測細(xì)胞增殖能力。

遷移實驗：使用Transwell小室或劃痕實驗檢測細(xì)胞遷移能力。

侵襲實驗：使用Matrigel包被的Transwell小室檢測細(xì)胞侵襲能力。

基因表達(dá)分析：使用qRT-PCR或Western Blot檢測相關(guān)基因或蛋白的表達(dá)水平。

數(shù)據(jù)分析

收集實驗數(shù)據(jù)，使用統(tǒng)計軟件（如SPSS、GraphPad Prism）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

繪制圖表，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，得出實驗結(jié)論。

實驗記錄

詳細(xì)記錄實驗操作步驟、實驗條件、實驗結(jié)果等信息，以便后續(xù)參考和復(fù)現(xiàn)。

請注意，以上步驟僅為一般性指導(dǎo)，具體實驗操作應(yīng)根據(jù)實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）和實驗設(shè)計進(jìn)行調(diào)整。如果您需要更詳細(xì)的實驗步驟或有其他相關(guān)問題，建議咨詢實驗室導(dǎo)師或查閱相關(guān)文獻(xiàn)。