免疫組化染色中，對(duì)照實(shí)驗(yàn)是確保結(jié)果可靠性的關(guān)鍵，我來幫你梳理常用的五種類型：

一、核心對(duì)照類型

?陽性對(duì)照?

?作用?：驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)體系有效性，確保染色過程正確進(jìn)行。

?示例?：檢測(cè)乳腺癌HER2蛋白時(shí)，使用已知HER2高表達(dá)的乳腺癌組織。

?意義?：若陽性對(duì)照未顯色，說明實(shí)驗(yàn)步驟（如抗體失效、操作失誤）存在問題。

?陰性對(duì)照?

?作用?：排除非特異性染色或背景干擾。

?示例?：檢測(cè)肺癌PD-L1時(shí)，使用正常肺組織或省略一抗作為陰性對(duì)照。

?意義?：若陰性對(duì)照顯色，可能因抗體交叉反應(yīng)、封閉不充分或二抗問題。

?空白對(duì)照?

?操作?：省略一抗，僅用二抗和顯色劑。

?意義?：檢測(cè)二抗非特異性結(jié)合或背景染色。

?示例?：僅使用基礎(chǔ)試劑（如一抗稀釋液），檢測(cè)內(nèi)源性干擾因素（如內(nèi)源酶活性）。

?同型對(duì)照?

?定義?：使用與一抗相同種屬和亞型的非特異性抗體。

?作用?：排除抗體非特異性結(jié)合產(chǎn)生的背景染色。

?示例?：一抗為單抗的mouse anti rat CD11b，clone OX-42 purified IgG，其同型對(duì)照為purified mouse IgG2a。

?內(nèi)對(duì)照?

?定義?：利用組織內(nèi)部已知表達(dá)/不表達(dá)目標(biāo)抗原的區(qū)域。

?作用?：通過內(nèi)部對(duì)比判斷染色特異性。

?示例?：腫瘤細(xì)胞陽性而周圍正常細(xì)胞陰性，可增強(qiáng)結(jié)果可信度。

二、對(duì)照設(shè)置的實(shí)際意義

?提高診斷準(zhǔn)確性?：避免將非特異性染色誤判為陽性。

?優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件?：幫助調(diào)整抗體濃度、孵育時(shí)間等參數(shù)。

?符合科研規(guī)范?：論文發(fā)表或臨床報(bào)告中，完整的對(duì)照數(shù)據(jù)是結(jié)果有效性的必要支撐。

三、對(duì)照實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)

?陽性對(duì)照?：需使用已知表達(dá)目標(biāo)抗原的組織或細(xì)胞。

?陰性對(duì)照?：需使用不表達(dá)目標(biāo)抗原的樣本，或用無關(guān)抗體替代一抗。

?空白對(duì)照?：需省略一抗，僅用二抗和顯色劑。

?同型對(duì)照?：需嚴(yán)格匹配一抗的種屬、Ig亞型、標(biāo)記物及濃度等參數(shù)。

?內(nèi)對(duì)照?：需在同一組織切片中存在已知不表達(dá)目標(biāo)抗原的細(xì)胞。