修飾性工具酶

（一）末端轉(zhuǎn)移酶（terminal transferase）

l 末端轉(zhuǎn)移酶是一類不依賴于DNA模板的DNA聚合酶。ELISA試劑盒

l 特性：該類酶可以在沒有模板鏈存在的情況下，將核苷酸連接到dsDNA或ssDNA的在3’－OH。特別是對于平末端的雙鏈DNA末端加尾十分有用。

l zui常見的用途：給外源DNA片段及載體分子加上互補的同聚物尾巴，以創(chuàng)造黏性末端，便于重組。

（二） SI核酸酶（SI nuclease）

這是一種從米曲霉（Aspergillus oryzae）中分離的高度單鏈特異的外切酶。

活性：可以降解單鏈DNA或RNA或雙鏈的單鏈區(qū)。

其主要用途有：

⑴　在cDNA合成過程中，切開cDNA的發(fā)夾末端；

⑵　載體構(gòu)建過程中，切去DNA片段的單鏈尾巴，ELISA試劑盒

形成平末端結(jié)構(gòu)。

（三）堿性磷酸酶

從大腸桿菌中分離的細菌堿性磷酸酶（Bacterial Alkaline Phosphatase）簡稱BAP。

從小牛腸中分離的叫小牛腸堿性磷酸酶（ Calf Intestinal Alkaline Phosphatase） ，簡稱CIP，用的廣泛。

酶催功能：

脫磷酸作用，將單鏈或雙鏈DNA或RNA5’－P轉(zhuǎn)化成5’－OH。

其主要用途有：

⑴在用32P標記DNA 5′端之前，去除5′端的磷；ELISA試劑盒

⑵在DNA重組技術(shù)中，去除DNA片段的5′磷酸，防止載體的自身環(huán)化，提高重組子比例。