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原代組織細(xì)胞的解離

更新時(shí)間:2016-08-05 點(diǎn)擊量:1017

.用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。用Hanks平衡鹽溶液(HBSS)將組織碎塊清洗數(shù)次。
2.加入膠原酶(50-200單位/ml膠原酶HBSS)。
3.在37℃ 下孵育4-8小時(shí)。加入3mM CaCl2 可以提高解離效率。
4.用滅菌的不銹鋼網(wǎng)或尼龍網(wǎng)過濾細(xì)胞懸浮液,將離散的細(xì)胞和組織片段與大塊的組織碎片分離。如需進(jìn)一步解離,可向組織片段中加入新鮮的膠原酶。
5.通過離心HBSS清洗細(xì)胞懸浮液數(shù)次。
6.用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。計(jì)算細(xì)胞個(gè)數(shù),然后接種細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

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