南非諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

0×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物（0pM）                 

2 μl     引物2（0pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

μl     DNA模板（50ng-μg/μl）  

μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用00μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-0μl電泳檢測(cè)。

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