人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)免疫組化試劑盒實驗步驟（建議方案）：

石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度

.烤片： 將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤 hr；

2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次

0 min；

3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%

乙醇2 min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O 洗2×2min；

4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說明書方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫

度達(dá)到98~00℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗2×

2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見附）* 注：有些抗原勿需修復(fù)，

直接進(jìn)入第5 步封閉。

5.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育30 min；

6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜；

7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；

8.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育0 min；

9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育

30 min；

0.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；

.封閉： 滴加試劑Tween 20，37℃濕盒孵育封閉20 min；

2.加HRP-SA： 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E（：50~200，終濃度5~20 nM），

37℃濕盒中孵育30 min；

3.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；

4.顯色：應(yīng)用DAB 溶液（試劑F）顯色；

5.復(fù)染：自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；

6.封片： 待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；

7.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。